Fluoreszenz Färbung einer murinen neonatale Kardiomyozytenzellkultur
Grün: neonatale Kardiomyozyten (Anfärbung von kardialem Aktin)
Rot: kardiale Fibroblasten (Anfärbung von Vimentin)
Neben immortalen Zell-Linien werden auch primäre Zellen wie adulte und neonatale Herzmuskelzellen, glatte Gefäßmuskelzellen der Maus und stammzellabgleitete humane iPS Zellen untersucht.
» Viraler Gentransfer:
Es werden rekombinante Adenoviren und Adenoassoziierte Viren eingesetzt, um Gene in primär kultivierte Säugerzellen einzuschleusen. Proteinbiochemische Untersuchungen werden an in Insektenzellen (Sf21) exprimierten, rekombinanten Proteinen durchgeführt.
» Molekularbiologie / Biochemie:
Neben gängigen Methoden zur Rekombination und Mutation von DNA, zur Quantifizierung von mRNAs und Proteinen werden spezifischere Methoden zur Untersuchung von Transkriptionsfaktoren (Gel-Shift-Assays, Chromatin-Immunopräzipitation, ChIP-to-Chip), Proteinphosphatasen (Aktivitätsbestimmungen), Calcium-regulierender Proteine (SERCA-Aktivität) oder Rezeptoren (Bindungsaktivität) eingesetzt.
» Einzelzell-Elektrophysiologie / Patch-Clamp:
Mit der Patch-Clamp Technik werden Aktionspotentiale und Ionenströme durch Kanalproteine (Summenströme) untersucht.
» Weitfeld-Fluoreszenzmikroskopie:
Durch Anwendung calciumsensitiver Farbstoffe, z.B. Indo-1/AM, kann gleichzeitig ratiometrisch die freie zytosolische Calciumkonzentration und die Zellverkürzung an der gleichen Herzmuskelzelle gemessen werden.
» Konfokalmikroskopie:
Komplexe morphologische und funktionelle Analysen werden mit einem Laserscanningmikroskop (Zeiss LSM710) durchgeführt. Für schonende und länger dauernde funktionelle Messungen steht ein Spinning disk-basiertes System (Yokogawa CSU-X1) am gleichen Stativ zur Verfügung. Ein integrierter Patch-Clamp Messplatz erlaubt gleichzeitige elektrophysiologische Messungen und zeitlich und örtlich hoch aufgelöste Untersuchungen zytosolischer Calciumkonzentrationen (Fluo-4) oder intrazellulärer Signalwege (FRET-Analysen) an der gleichen Zelle.
» Herzfunktion:
Funktionelle Untersuchungen an Mausherzen umfassen die linksventrikuläre Katheterisierung (Millar-System), die Ableitung von Elektrokardiogrammen, Messungen an isolierten Herzen (Working Heart) sowie elektrisch stimulierten Papillarmuskeln bzw. Vorhofpräparationen.